小肠结肠炎耶尔森氏菌是引起人类胃肠炎、肠系膜淋巴结炎甚至败血症的重要食源性病原体,尤其在低温环境下仍可缓慢增殖,具有“嗜冷”特性。为实现快速、准确检测,小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基因其高选择性与直观判读优势被广泛采用。然而,其检测效能高度依赖于前期样品处理方式是否与其兼容。若前处理不当,可能导致目标菌被抑制、非目标菌过度生长或目标菌数量不足,从而造成假阴性或假阳性。因此,充分理解并优化样品前处理与显色培养基的兼容性,是保障检测可靠性的关键环节。
一、不同样本类型的前处理差异
临床样本(如粪便)通常含有大量正常菌群,需通过选择性增菌提高耶尔森氏菌比例。常用方法包括在磷酸盐缓冲液进行25–28℃冷增菌18–48小时,以抑制大肠杆菌等中温菌,同时促进耶尔森氏菌生长。此增菌液可直接划线接种至显色培养基,兼容性良好。
食品样本(如猪肉、乳制品、生鲜蔬菜)则需先均质化,并根据基质复杂程度选择是否进行前增菌,再转接至选择性增菌液。高脂肪或高蛋白食品可能干扰显色反应,因此前处理中应充分离心或过滤,减少杂质对培养基pH及显色底物的影响。
环境水样(如河水、加工用水)因目标菌浓度极低,通常需大体积过滤浓缩,再将滤膜放入增菌液中培养。此类前处理产生的样本液成分较洁净,对显色培养基干扰小,但需注意滤膜残留消毒剂(如氯)可能抑制细菌生长,必要时添加中和剂(如硫代硫酸钠)。
二、前处理对显色培养基性能的影响
显色培养基依赖特定酶切割显色底物产生颜色。若干扰物质(如食品色素、胆汁盐残留、抗生素代谢物)进入培养体系,可能抑制酶活性或改变菌落背景色,导致误判。例如,未经充分稀释的粪便悬液直接接种,可能因高浓度胆盐抑制耶尔森氏菌生长,使其无法形成典型洋红色菌落。
此外,前处理中使用的抗生素虽能抑制革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌,但若残留量过高,可能对耶尔森氏菌本身产生轻微抑制,延缓显色时间。因此,划线前建议适当稀释增菌液或采用中和步骤。
三、标准化与验证的重要性
为确保兼容性,前处理流程应尽量遵循标准方法。这些方法已验证其与主流显色培养基(的匹配性。实验室若自行优化前处理条件(如缩短增菌时间、更换缓冲液),需进行加标回收实验,验证目标菌回收率与显色特异性是否达标。
四、操作建议
所有样本增菌后应充分混匀再取样接种;
避免将高浓度原始样本直接涂布显色平板;
对复杂基质样本,建议设置未接种对照平板,观察背景干扰;
记录前处理参数(温度、时间、稀释倍数),便于结果溯源。
综上所述,小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基虽具备优异的识别能力,但其效能发挥离不开科学、规范的样品前处理。只有根据样本类型合理选择增菌策略、控制干扰因素,并与标准方法保持一致,才能保持显色培养基的灵敏度与特异性,为食品安全与临床诊断提供可靠依据。