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    触酶试验酶液制备的实验步骤

    点击次数:174 发布时间:2022-10-27
      触酶试验是关于触酶的一个实验做法。大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶,但链球菌属阴性,故常用此试验来鉴定。分枝杆菌的鉴别则用耐热触酶试验,结核分枝杆菌为阴性,戈氏分枝杆菌和地分枝杆菌为阳性。
     
      触酶试验酶液的制备:
     
      1.称取叶片 0.25g ,加入5倍量的(M/V)pH7.0 的PBS冰浴研磨 15000r/min
     
      离心15min取部分上清液经适当稀释后用于酶活性测定。
     
      2.CAT活性的测定
     
      在3ml的反应体系中,包括0.3% H2021ml, H20 1.95ml, 最后加入0.05ml酶液
     
      启动反应,测定波长240nm处的OD降低速度。将每分钟OD减少0.01定义为1个活力单位。
     
      3.POD活性的测定
     
      在3ml的反应体系中,包括0.3% H2021ml, .0.2% 愈创木酚0.95ml,pH7.0的PBS 1ml,最后加入0.05ml酶液启动反应,记录470nm处OD增加速度。将每分钟OD增加0.01定义为1个活力单位。
     
      4. 用考马斯亮蓝 G-250法测定蛋白含量。
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