触酶试验酶液制备的实验步骤

点击次数：801 更新时间：2022-10-27

　　触酶试验是关于触酶的一个实验做法。大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球菌属阴性，故常用此试验来鉴定。分枝杆菌的鉴别则用耐热触酶试验，结核分枝杆菌为阴性，戈氏分枝杆菌和地分枝杆菌为阳性。

　　触酶试验酶液的制备：

　　1.称取叶片 0.25g ，加入5倍量的(M/V)pH7.0 的PBS冰浴研磨 15000r/min

　　离心15min取部分上清液经适当稀释后用于酶活性测定。

　　2.CAT活性的测定

　　在3ml的反应体系中，包括0.3% H2021ml, H20 1.95ml, 最后加入0.05ml酶液

　　启动反应，测定波长240nm处的OD降低速度。将每分钟OD减少0.01定义为1个活力单位。

　　3.POD活性的测定

　　在3ml的反应体系中，包括0.3% H2021ml, .0.2% 愈创木酚0.95ml,pH7.0的PBS 1ml，最后加入0.05ml酶液启动反应，记录470nm处OD增加速度。将每分钟OD增加0.01定义为1个活力单位。

　　4. 用考马斯亮蓝 G-250法测定蛋白含量。