手把手教你操作B族链球菌显色培养基
B族链球菌显色培养基检测GBS需要18-24小时,且无需特殊培养条件和次代培养,平板上的菌落可进行药敏和血清分型,也可用于对标本中细菌含量的半定量评估,是一种灵敏,快速的GBS检测方法。
原理:
B族链球菌感染是引起新生儿疾病和死亡的主要原因。B族链球菌也可引起孕妇、老年人的严重疾病和成为并发症。B族链球菌通常位于女性阴道和男女直肠内。在新生儿中,B组链球菌常引起败血症、脑膜炎和肺炎。在成年人,B族链球菌偶尔会引起严重的血液感染、尿路感染、皮肤感染和肺炎,尤其是免疫较弱的人群。母亲的生殖道感染与婴儿感染和新生儿疾病风险存在关联。
样本采集通常在怀孕35~37周拭子采集阴道和直肠来完成。然后将拭子接种到B族链球菌选择性显色琼脂上。传统方法是通过Todd Hewitt肉汤(含黏菌素和萘啶酸)增菌,再传代到血平板上完成,以达到较大回收率。B族链球菌显色培养基中的蛋白质水解物提供氮源和碳源化合物、长链氨基酸和其他链球菌生长必需的的营养素。缓冲盐提供培养基的缓冲能力。培养基中的选择因子抑制伴随的菌群。培养基中的显色剂被B族链球菌的β-葡萄糖苷酶裂解,使B族链球菌菌落显蓝色。培养基不透明的黄色本底,有利于更好的观察。
操作:
.基础干粉+增补剂S1 取瓶内B族链球菌显色培养基基础干粉加入1000ml蒸馏水中(可根据需要按照44.7g/L的比例扩大或缩小),搅拌溶解,然后,按照2g/L的比例加入增补剂S1,搅拌至琼脂*溶解。常规高压灭菌(121℃,15min),然后水浴冷却至45-50℃,保持搅拌。
.增补剂S2 取透明的容器,用10ml蒸馏水溶解0.25g增补剂S2,(按照25mg/ml的比例扩大或缩小),用磁力搅拌器快速搅拌均匀,使其*溶解。B族链球菌显色培养基过滤除菌后,按照10ml/L的比例加入已备好的基础干粉+增补剂S1的混匀液体中,轻轻混匀,然后倾入无菌培养皿中,使其凝固。