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    产碳青霉烯酶的操作法则

    点击次数:397 发布时间:2019-02-15
       产碳青霉烯酶的操作法则
      产碳青霉烯酶作为细菌(尤其是革兰阴性杆菌)主要耐药机制,自1982年英国从粘质沙雷菌中分离出碳青霉烯酶以来,已陆续报道70余种碳青霉烯酶。由于产酶编码基因位于染色体或质粒上,可以快速整合至细菌中,特别是临床分离的铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药率不断增高,给临床治疗和医院感染防控带来巨大的挑战。
      产碳青霉烯酶具有很广泛的水解底物谱,临床一旦遇到产该酶的菌株,很难治疗,目前尚无有效药物。进行联合药敏试验,或进行联合抗菌药治疗。目前已报道的可检测产碳青霉烯酶的方法主要有EDTA协同试验、改良Hode试验、三维试验(以亚胺培南替代头孢西丁,其余操作相同)以及Etest法。
      操作:
      1、基础培养基:取瓶内干粉42.5g溶于1000mL去离子水的洁净三角瓶中,移取2.0ml增补剂S1加入到培养基内,充分搅拌混匀。也可根据需要按照42.5g/L和2.0ml/L的比例扩大或缩小制备培养基的量。
      2、加热至100℃,不停搅拌,使其完全溶解。若使用微波炉加热,应将培养基加热沸腾,立即移出,轻轻摇匀,再放入微波炉加热,观察小气泡变为大气泡,直至完全溶解即可。切勿使培养基溢出。
      3、增补剂S2:取增补剂S20.25g溶于2.0ml无菌去离子水中,搅拌均匀,过滤(0.45um滤膜)备用。也可根据需要按照0.25g/L的比例扩大或缩小制备增补剂的量。
      4、将溶解完全的增补剂S2加入到冷却至45℃~50℃的基础培养基和增补剂S1中,轻轻地摇动均匀,配制成产碳青霉烯酶的显色培养基,倾注平皿,使其凝固,晾干备用。
      保存该成品平板在室温可保存一天或在冰箱内贮存1个月(2℃~8℃,避光)。
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